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étapes de préparation d'un spécimen
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étapes de préparation d'un spécimen

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La préparation des échantillons comporte 5 étapes : 1. Fixation La fixation est effectuée immédiatement après le prélèvement de l'échantillon à observer.Il est utilisé pour immobiliser et conserver l’échantillon de manière permanente dans un état aussi réaliste que possible.Elle peut être réalisée à l'aide d'une solution fixatrice ou par congélation : – La fixation dans une solution fixatrice est réalisée par immersion du matériel biologique dans une solution de formol.– La fixation par congélation consiste à plonger l'échantillon dans un milieu de congélation tissulaire (à l'état liquide à température ambiante et à l'état solide à -20°C), qui est ensuite refroidi dans de l'azote liquide.L'échantillon congelé est conservé jusqu'à la section.Cette étape est réalisée dans un moule selon l'orientation retenue pour un sectionnement ultérieur.2. Enrobage L'enrobage est l'étape qui suit la fixation dans une solution fixatrice.Elle consiste à durcir l'échantillon dans un milieu enrobé de paraffine, afin de pouvoir réaliser la section.Il est nécessaire de déshydrater au préalable l’échantillon, en remplaçant les molécules d’eau présentes dans l’échantillon par de l’éthanol.Comme l'éthanol et la paraffine ne sont pas miscibles, un agent intermédiaire « clarifiant » miscible à la paraffine est d'abord utilisé.Après l’étape de clarification, les échantillons sont plongés dans des bains de paraffine.Ces étapes sont réalisées à l'aide d'un automate de déshydratation.L'étape d'intégration suivante est effectuée à l'aide d'un centre d'intégration.L'échantillon est placé dans un moule rempli de paraffine fondue et est soigneusement orienté selon son plan de section.Le bloc obtenu est ensuite refroidi.Ensuite, l'échantillon est sectionné à l'aide d'un microtome.3.La section est réalisée par microtomie ou cryotomie.La coupe est une étape importante pour la préparation des lames car elle garantit une bonne observation de l’échantillon par microscopie.– Les échantillons inclus en paraffine sont découpés par coupe transversale, à l'aide d'un microtome, en fines tranches de 5 micromètres.Les lames de verre sont recouvertes d'une solution contenant un additif afin de maintenir la section attachée à la lame.Les lames sont ensuite placées sur une plaque chauffante afin d'assurer une répartition uniforme de l'échantillon.Une fois les lames chauffées, le liquide résiduel est éliminé à la main.Les lames sont ensuite séchées à température ambiante.– Les échantillons congelés sont découpés à l'aide d'un cryostat.Les coupes congelées sont ensuite placées sur une lame de verre pour être conservées à -80°C.Bioalternatives évalue les conditions de fixation et de section adaptées en fonction de votre échantillon et de votre étude.Le choix de ces conditions de préparation est crucial afin de minimiser les artefacts.L'inclusion en paraffine est privilégiée pour préserver les tissus ;la congélation est plus adaptée à la conservation de l'ADN et de l'ARN et au marquage des éléments hydrosolubles ou sensibles au milieu de fixation.5. Montage Les sections sont montées entre les lames et les lamelles à l'aide d'un produit pour garantir l'adhérence.Les diapositives sont alors prêtes pour le stockage ou l’observation.Pour les observations en microscopie à fluorescence, un milieu de montage est utilisé afin de diminuer temporairement la perte de fluorescence.4. Coloration et immunomarquage – La coloration augmente les contrastes afin de reconnaître et différencier les différents composants du matériel biologique.L'échantillon est d'abord déparaffiné et réhydraté afin que les colorants polaires puissent imprégner les tissus.Les différents colorants peuvent ainsi interagir avec les composants à colorer selon leurs affinités.Une fois la coloration terminée, la lame est rincée et déshydratée pour l'étape de montage.– L’immunomarquage détecte les composants cellulaires et tissulaires particuliers (antigènes) à l’aide d’anticorps polyclonaux ou monoclonaux.Une solution contenant l’anticorps est déposée sur l’échantillon, qui est ensuite lavé afin d’éliminer les anticorps non liés.

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